透明质酸钠
1 范围
本标准规定了透明质酸钠的产品分类、术语与定义、要求、试验方法、检验规则、包装、标志、运输、贮存与保质期。
本标准适用于本公司以糖质为主要原料，经微生物发酵、提取、结晶等工艺制成的透明质酸钠，也可称为透明质酸。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志
GB/T 601—2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备
GB/T 602—2002 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备
GB/T 603—2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备
GB 4789.2－2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
GB 4789.3－2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠菌群计数
GB 4789.4－2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验
GB 4789.10－2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB 4789.15－2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数
GB/T 5009.11－2003 食品中总砷及无机砷的测定
GB/T 5009.74－2003 食品添加剂中重金属限量试验
GB/T 6543—2008 运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱
GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 7917.2－1987 化妆品卫生化学标准检验方法 砷
GB/T 7917.3－1987 化妆品卫生化学标准检验方法 铅
GB/T 7918.3－1987 化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群
GB/T 7918.4－1987 化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌
GB/T 7918.5－1987 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌
JJF 1070—2005 定量包装商品净含量计量检验规则
国家质量监督检验检疫总局令第75号《定量包装商品计量监督管理办法》
卫监督发［2007］］1号 化妆品卫生规范
3 产品分类
根据产品的用途分为两类，即1号透明质酸钠和2号透明质酸钠。
4 术语和定义
4.1
1 号透明质酸钠
以葡萄糖和酵母粉为原料，经发酵法加工制成的的粉末或颗粒状固体透明质酸钠，作为化妆品用原料。
4.2
2 号透明质酸钠
以葡萄糖和酵母粉为原料，经发酵法加工制成的的粉末或颗粒状固体透明质酸钠，作为保健品、食品用原料。
5 要求
5.1 外观指标
白色粉末或白色颗粒状。
5.2 理化指标
1号透明质酸钠、2号透明质酸钠应符合表1的规定。
表1 理化指标
项 目 指 标
葡萄糖醛酸，% ≥ 44.0
蛋白质，% ≤ 0.10
干燥失重，% ≤ 10.0
灰分，% ≤ 13.0
0.1%透明质酸（钠）水溶液透光率，% ≥ 99.0
0.5%透明质酸（钠）水溶液 pH 值（25℃） 5.5～7.5
5.3 卫生指标
5.3.1 1 号透明质酸钠
应符合表3的规定。
表2 1 号透明质酸钠卫生指标
项 目 指 标
重金属（以Pb计），mg/kg ≤ 20
砷（以As计），mg/kg ≤ 2
菌落总数，cfu/g ≤ 100
霉菌、酵母菌，cfu/g ≤ 50
金黄色葡萄球菌 不得检出
沙门氏菌 不得检出
铜绿假单胞菌 不得检出
粪大肠菌群 不得检出
绿脓杆菌 不得检出
5.3.2 2 号透明质酸钠
应符合表4的规定。
表3 2 号透明质酸钠卫生指标
项 目 指 标
重金属（Pb），mg/kg ≤ 10
砷（As计），mg/kg ≤ 2
菌落总数，cfu/g ≤ 100
霉菌、酵母菌，cfu/100g ≤ 100
金黄色葡萄球菌 不得检出
沙门氏菌 不得检出
大肠菌群 不得检出
5.4 净含量
应符合国家质量监督检验检疫总局75号令《定量包装商品计量监督管理办法》。
6 试验方法
6.1 一般要求
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂（AR）和符合GB/T 6682—2008规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
6.2 外观
在光线明亮但非阳光直射下目测观察。
6.3 理化指标
6.3.1 葡萄糖醛酸
6.3.1.1 试剂和溶液
6.3.1.1.1 0.025mol/L 四硼酸钠硫酸溶液：称取 Na2B4O7•10H2O 4.770g，精确到 0.0002g，溶于 500mL浓 H2SO4（AR）中，完全溶解且混合均匀后，（4±1）℃下静置隔夜后使用。（4±1）℃下保存。
6.3.1.1.2 0.125%咔唑无水乙醇溶液：称取咔唑 0.125g，精确到 0.0002g，溶于 100mL 乙醇（AR）中，完全溶解且混合均匀后，置于棕色瓶，（4±1）℃下保存。
6.3.1.1.3 葡萄糖醛酸标准样品。
6.3.1.2 仪器
试验所用仪器如下：
——比色管；
——分析天平（精度为 0.0001g）；
——水浴锅；
——分光光度计；
——玻璃器皿。
6.3.1.3 步骤
6.3.1.3.1 标准曲线制备
6.3.1.3.1.1 配制标准溶液
用分析天平精确称取标准葡萄糖醛酸（AR）0.100g，精确到0.0002g，少量蒸馏水完全溶解后，定容至500mL。分别吸取此标准溶液0 mL、5.00 mL、10.00 mL、15.00 mL、20.00 mL、25.00 mL加入100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得到浓度分别为0µg /mL、10µg /mL、20µg /mL、30µg /mL、40µg /mL和50µg /mL的标准系列。
6.3.1.3.1.2 测量吸光度
取6只25mL的具塞试管分别加入以上不同浓度的标准溶液各1.0mL，加入5mL 4℃左右的四硼酸钠硫酸溶液，充分混匀后，用冷水冷却到室温，冷却后置于沸水浴加热10min，取出冷却至室温，加0.2mL咔唑试剂，摇匀，置沸水浴加热15min，取出冷却至室温，以第一管为空白，测定各反应液在530nm处的吸光度A值。
6.3.1.3.1.3 绘制标准曲线
以吸光度A值为横坐标，标准液浓度C为纵坐标，作直线回归数据处理，计算出A和C的线性回归方程：
C＝b+kA ......................................... (1)
式中：
C——标准液浓度，单位为µg /mL；
A——吸光度，单位为L/(g·cm) ；
b——
k——
注1：以硫酸为对照测得空白的吸光度应小于 0.025。
注2：一般地，使用新配制的四硼酸钠硫酸溶液需要重新制作标准曲线。
6.3.1.3.2 样品葡萄糖醛酸含量的测定
6.3.1.3.2.1 配制样品溶液
称取约0.025g(m) 透明质酸钠样品，精确到0.0002g，于烧杯中，加适量蒸馏水，搅拌至完全溶解后，用蒸馏水定溶至250mL。
6.3.1.3.2.2 测定样品吸光度
吸取1mL样液按标准曲线制备操作方法进行测定，测定其吸光度A值S。
6.3.1.3.2.3 计算葡萄糖醛酸含量
平行测定二份样品S1、S2，取平均值S，通过标准曲线读取对应的值即葡萄糖醛酸浓度C。
6.3.1.3.3 计算公式
葡萄糖醛酸含量、透明质酸钠含量的计算公式（2）、公式（3）如下所示：
葡萄糖醛酸含量（%）＝（C×250×10-6×100）/[m×（1－W /100）] .............. (2)
式中：
C ——标准曲线查出值，单位为微克（µg /mL）；
m ——样品重量，单位为克（g）
W ——样品干燥失重，单位为克（g）。
透明质酸钠含量（%）＝葡萄糖醛酸含量（%）/48.38×100 ................... (3)
式中：
48.38——葡萄糖醛酸占整个透明质酸钠分子理论值(%)
注：稀释时应注意到，因样液有粘度会使样液残留在吸管口，造成误差。可使用“吹”型吸管，用洗耳球吹以减少误差。
6.3.2 蛋白质（考马斯亮蓝法）
6.3.2.1 试剂和溶液
6.3.2.1.1 考马斯亮蓝试液：考马斯亮蓝 0.1g，溶于 95%乙醇 50mL，再加 85%磷酸 100mL，最后加蒸馏水稀释至 1000mL，用 2 号滤纸过滤备用。置于棕色瓶内，（4±1）℃下保存。
6.3.2.1.2 专用试剂 BSA（Bradford reagent，Sigma）：牛血清蛋白标准品。
6.3.2.2 仪器
试验仪器所用仪器如下：
——分析天平（精度为 0.0001g）；
——分光光度计；
——玻璃器皿。
6.3.2.3 步骤
6.3.2.3.1 标准曲线制备
称取经60℃、真空度0.08MPa烘一小时后的BSA0.1g，精确到0.0002g，置于1000mL容量瓶中，加少量蒸馏水溶解定容至刻度，制得100µg /mL的BSA对照品液。分别取BSA标准液0mL、5.00mL、10.00mL、15.00mL、20.00mL、25.00mL到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，取具塞试管6支，以上溶液各取1.0 mL，得到含0µg、5µg、10µg、15µg、20µg、25µg的标准系列。分别加入考马斯亮蓝试液4mL，立即混匀，5min后在595nm波长处用1cm比色池测定吸光度，以BSA微克数对吸光度作图，得标准曲线，或计算出曲线回归方程。
6.3.2.3.2 样品蛋白质含量的测定
称取透明质酸钠样品0.400g左右，精确到0.0002g，于烧杯中，加适量蒸馏水，搅拌至完全溶解后，置于100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，取1mL于具塞试管中，按标准曲线制备操作方法测定其吸光度，从标准曲线查出相应蛋白质质量m1（µg），以此计算透明质酸钠样品的蛋白质含量。
6.3.2.4 计算公式
蛋白质含量的计算公式（4）如下所示：
蛋白质含量（%）＝（m1×10-6×100×100）/[m×（1－W /100）] ................ (4)
式中：
m1－标准曲线查出值，单位为微克（µg）；
m－样品重量，单位为克（g）；
W－样品干燥失重，单位为克（g）。
6.3.3 干燥失重
6.3.3.1 试剂和溶液
样品。
6.3.3.2 仪器
试验所用仪器如下：
——分析天平（精度为 0.0001g）；
——干燥箱；
——玻璃器皿。
6.3.3.3 步骤
用已知重量的称量瓶称取0.500g左右样品（W2），精确到0.0002g，置于105℃～110℃真空干燥箱内干燥至恒重，取出放置于干燥器内，待冷却至室温后称重W1。
6.3.3.4 计算公式
干燥失重的计算公式（5）如下所示：
W（%）＝[（W2－W1）/ W2] ×100 .............................. (5)
式中：
W——干燥失重；
W1——干燥后样品重量，单位为克（g）；
W2——干燥前样品重量，单位为克（g）。
注3：为减少误差，称量瓶应洁净，经烘干并在干燥器内冷却至室温。
注4：称取样品时应快速，以免样品吸潮。
6.3.4 灰分
6.3.4.1 试剂和溶液
样品。
6.3.4.2 仪器
试验所用仪器如下：
——分析天平（精度为 0.0001g）；
——高温马弗炉；
——干燥器；
——耐温瓷皿。
6.3.4.3 步骤
用分析天平以称量瓶称取1.000g左右（m1），精确到0.0002g的样品于已知重量的耐温瓷皿中，在高温马弗炉中升温灼烧，至800～850℃时再灼烧6h，取出稍冷后放置于干燥器内，待冷却至室温后称重m2。
6.3.4.4 计算公式
灰分的计算公式（6）如下所示：
灰分（%）＝ [（m1－m2）/ m1] ×100 ........................... (6)
式中：
m1——灼烧前样品重量，单位为克（g）；
m2——灼烧后样品重量，单位为克（g）。
注5：为减少误差，耐温器皿应洁净，经烘干并在干燥器内冷却至室温。
注6：称取样品时应快速，以免样品吸潮。
6.3.5 澄清度
6.3.5.1 试剂和溶液
样品。
6.3.5.2 仪器
试验所用仪器如下：
——分析天平（精度为 0.0001g）；
——分光光度计；
——玻璃器皿。
6.3.5.3 步骤
6.3.5.3.1 试液制备
称取透明质酸钠样品0.100g，精确到0.0002g，于烧杯中，加适量蒸馏水，搅拌至完全溶解后，置于100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，得到0.1%透明质酸钠水溶液，供澄清度测定使用。
6.3.5.3.2 澄清度测定
用蒸馏水作为空白，在600nm下用1cm比色池测定其透光率为澄清度。
6.3.6 pH 值
6.3.6.1 试剂和溶液
样品溶液、0.025mol/L混合磷酸盐溶液、0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾。
6.3.6.2 仪器
试验所用仪器如下：
——玻璃器皿；
——pH 酸度计。
6.3.6.3 步骤
6.3.6.3.1 试液制备
称取透明质酸钠样品0.500g，精确到0.0002g，于烧杯中，加适量蒸馏水，搅拌至完全溶解后，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，得到0.5%透明质酸钠水溶液，供pH值测定使用。
6.3.6.4 测定
取6.6.3.1试液（0.5%透明质酸钠水溶液），直接用pH酸度计测定其pH值。
6.4 卫生指标
6.4.1 重金属（以 Pb 计）
1号透明质酸钠按GB/T 7917.3－1987执行，2号透明质酸钠按GB/T 5009.74－2003执行。
6.4.2 砷（以 As 计）
1号透明质酸钠按GB/T 7917.2－1987执行，2号透明质酸钠按GB/T 5009.11－2003执行。
6.4.3 菌落总数
用1：100稀释样，1号透明质酸钠按卫监督发［2007］］1号《化妆品卫生规范》中第四部分微生物检验方法第262页的规定执行，2号透明质酸钠按GB 4789.2－2010执行。
6.4.4 霉菌、酵母菌
用1：100稀释样，1号透明质酸钠按卫监督发［2007］］1号《化妆品卫生规范》中第四部分微生物检验方法第274页的规定执行，2号透明质酸钠按GB 4789.15－2010执行。
6.4.5 金黄色葡萄球菌
用1：100稀释样，1号透明质酸钠按GB/T 7918.5－1987执行，2号透明质酸钠按GB 4789.10－2010执行。
6.4.6 沙门氏菌
用1：100稀释样，按GB 4789.4－2010执行。
6.4.7 铜绿假单胞菌
按照卫监督发［2007］］1号《化妆品卫生规范》中第四部分微生物检验方法第268页的规定执行。
6.4.8 粪大肠菌群
用1：100稀释样，按GB/T 7918.3－1987执行。
6.4.9 绿脓杆菌
用1：100稀释样，按GB/T 7918.4－1987执行。
6.4.10 大肠菌群
用1：100稀释样，按GB 4789.3－2010执行。
6.5 净含量
按JJF 1070—2005规定执行。
7 检验规则
7.1 组批
以每一发酵罐或连续生产一次的产品为一批。
7.2 取样
产品检验实行随机取样，每批产品取样量不少于22g，混匀后，分别保存于灭菌过的取样瓶中，除检验用，还应有足够的留样，以备后查。
7.3 出厂检验
7.3.1 每批产品须经质检部门按本标准规定的方法检验合格，出具产品质量证明书后方可出厂。
7.3.2 出厂检验项目为：第 5 章全部要求。
7.4 判定规则
7.4.1 出厂检验：出厂检验项目全部符合，判该批产品合格。
7.4.2 若外观指标、净含量不合格，则判定该批产品不合格，若除外观指标、净含量以外指标中有不合格项，对不合格项目从该批中加倍抽样复验。复验结果，仍有一项不合格，判定该批产品为不合格品，复验结果全部符合，判该批产品合格。
8 标志、包装、运输、贮存和保质期
8.1 标志
8.1.1 在产品的外层包装上应标明产品名称、商标、标准编号、生产厂名、厂址、生产日期、保质期、净含量等内容，也可根据客户需要设计包装标识。
8.1.2 运输包装图形标志应符合 GB/T 191 的规定。
8.2 包装
8.2.1 内包装采用铝箔袋或塑料瓶，材质应无毒、无害、无异味，其中 2 号透明质酸的包装材料应采用食品级。铝箔袋包装每包净含量为 100g，塑料瓶包装每瓶净含量为 100g。
8.2.2 外包装采用瓦楞纸箱，瓦楞纸箱应符合 GB/T 6543—2008 的规定。包装箱必须牢固与所装内容物尽量匹配、胶封、捆扎结实。每 10 包或每 10 瓶用纸箱包装。
8.2.3 也可根据客户需要调整包装规格。
8.3 运输
产品在运输过程中，应轻装轻卸，应避免日晒、雨淋和包装破裂，严禁与有毒、有异味、易挥发、易腐蚀的物品混装运输。
8.4 贮存
应在清洁、干燥、密闭暗凉、无虫害、无鼠害、无霉变、无污染的仓库内贮存。严禁受潮及露天堆放，严禁与有毒、有害的物品混存。
8.5 保质期
在符合上述规定的包装、运输、贮存条件下，自生产之日起，保质期为24个月。