促肾上腺皮质素合成

方法一、酸丙酮提取法。

　　腺垂体干粉的制备将新鲜猪脑垂体迅速投入丙酮中，浸泡脱水三次，每次24h，至脑垂体为粉红色变硬为止。将腺垂体、神经垂体严格分离，分别贮存于丙酮中。否则腺垂体中含有神经垂体时会使加压素超限。制备时将腺垂体取出干燥、磨粉、过40-60目筛，得腺垂体干粉(水分应低于6%)。

　　猪脑垂体[丙酮]→腺垂体[干燥、磨粉]→腺垂体干粉

　　促皮质素的提取在腺垂体粉10kg中加入丙酮调成糊状，再加入丙酮总量为84L，搅拌下加入36L的1mol/L盐酸，于50℃维持30min，速降温至30℃以下过滤，滤液用冰冷却到约4℃。滤渣用28L丙酮和12L的0.1mol/L盐酸，再重复提取一次，过滤。合并两次滤液，温度约为4℃时，反复过滤至澄清。

　　腺垂体干粉[丙炯，HCl]→[50℃, 30min]促皮质素的提取[过滤]→[4℃]滤液

　　促皮质素成品的制备按体积加入0.3%的5mol/L氯化钠液，搅匀，加入8-10倍量丙酮，搅拌10min后放置5min。去除丙酮清液，用3号垂熔漏斗过滤沉淀，再分别用丙酮和无水乙醚各洗2次，真空干燥，即得促皮质素成品。

　　滤液[NaCl, 丙酮]→[真空干燥]促皮质素成品

方法二、交联羧甲基纤维素(CMC)精制法

　　腺垂体的提取取腺垂体干粉1kg，加入20L的0.5mol/L醋酸(先预热到50℃)，搅拌，缓慢滴加约100ml的50%硫酸，调pH2-2.4，升温到70-75℃，维持10min，速冷至20℃以下，加入用0.5mol/L醋酸浸泡过夜的硅藻土约400-600g，过滤，滤液冷藏。滤渣再同法处理一次(0.5mol/L醋酸15L，50%硫酸20ml，硅藻土200g)。残渣再用0.5mol/L醋酸2L洗涤，过滤。合并3次滤液，用10%氢氧化钠液调pH为3.1-3.4，先后分别用布氏漏斗、4号垂熔漏斗过滤至澄清，滤液冷藏过夜。

　　腺垂体干粉[HAc, H2SO4]→[pH2-2.4, 70-75℃]腺垂体提取液[NaOH]→[pH3.1-3.4]滤液

　　吸附、洗脱将冷藏滤液调pH3.1后，加入40ml聚山梨酯80和200g交联CMC，在3℃搅拌下吸附12h，冷藏过夜。然后吸去上清液，沉淀用3号垂熔漏斗过滤，收集CMC，先后用0.1mol/L醋酸10L和蒸馏水10L，各分3次洗涤CMC，在15℃左右抽干，再用800ml的0.15mol/L盐酸洗脱1次。合并滤液，加入717或ZeroliFF阴离子交换树脂约2000g，立即调pH为3以上，过滤，树脂用1L的0.1mol/L醋酸洗涤，滤液合并，用0.5mol/L盐酸或氢氧化钠调pH为3.1，冷藏过夜。

　　腺垂体滤液[CMC, pH3.1]→[3℃,12h]吸附物[HAc,蒸馏水，HCl]→[pH3.1,15℃]洗脱液

　　二次吸附、洗脱将冷藏洗脱液中加入10-12ml聚山梨酯80，搅匀后加入30gCMC，在1-5℃搅拌吸附12h，冷藏过夜。次日吸去2/3的上清液，留下1/3用4号垂熔漏斗过滤，收集CMC，分别用0.1mol/L醋酸4L和蒸馏水4L，各洗涤2次，抽干，加入pH4.8的0.01mol/L醋酸铵溶液1.3L，在15℃以下搅拌15min，过滤抽干，蒸馏水1.2L洗1次，再加pH6.7的0.1mol/L醋酸铵溶液1.3L，于10-15℃搅拌15min，过滤后用3L蒸馏水分2次洗涤，抽干。用0.15mol/L盐酸1L于25℃搅拌洗脱1.5h，过滤，用160ml的0.15mol/L盐酸洗CMC1次，洗液并入洗脱液中。

　　洗脱液[CMC]→[1-5℃,12h]吸附物[HAc, 蒸馏水，醋酸铵]→[10-15℃]吸附物[HCl, 25℃]→洗脱液

　　促皮质素的精制加人717或ZerolitFF阴离子交换树脂约300g，调节pH为4左右，过滤。用0.1mol/L醋酸150ml洗树脂1次，洗涤液与滤液合并，加732阳离子交换树脂约84g，pH调回到3左右，过滤，用0.1mol/L醋酸50ml洗树脂1次，洗涤液并入滤液中，冷冻干燥，即得精制促皮质素。

　　洗脱液[阴、阳离子交换树脂]→[冻干]精制促皮质素。