检测原理
1、罗丹明B具有脂溶性，被用作调味品（主要是辣椒粉和辣椒油）染色剂。使用了被污染的调味品制作食品时会造成残留。调味品使用罗丹明B染色时含量较高，甚至直接掺入，可进行现场检测。食品中因其含量较低，需送实验室检测。

2、现场检测中使用非极性有机溶剂（例正己烷、正己烷+丙酮等）将其溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂（例正己烷）淋洗小柱，洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，用肉眼可观测到在小柱上出现鲜亮的粉红色条带，判定为可疑样品，该样品需送实验室作进一步确证检验。

3、实验室检测法仍然采用非极性有机溶剂（例正己烷、正己烷+丙酮等）将罗丹明B 从食品中溶解并提取出，提取液流过中性氧化铝固相萃取小柱吸附罗丹明B，用非极性有机溶剂（例正己烷）洗脱样品油脂和食品内源性干扰物，再用极性有机溶剂（例甲醇）将罗丹明B从小柱上洗脱并收集，用反相高效液相色谱仪-紫外/可见光检测器进行定性定量检测。

检测试剂
1、试剂和材料：层析用中性氧化铝（100目），用前于105℃烘2小时，取下置干燥器中冷至室温，装入玻璃瓶中密闭放置。
2、正己烷（分析纯）、 丙酮（分析纯）、 甲醇（色谱纯）；
3、 20%丙酮的正己烷液：取100ml丙酮加400ml正己烷混合，作为罗丹明B的提取液和净化液。 氧化铝固相萃取小柱：取5 ml塑料注射器管，下端口塞入小块脱脂棉，装入处理好的氧化铝约3cm高，放置备用。
4、 罗丹明B标准溶液：称取罗丹明B （分析纯试剂 沈阳试剂三厂）5.0mg，用20%丙酮的正己烷液（3.3）溶解并定容至50ml，配成含量为100ug/ml的标准储备液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml，用20%丙酮的正己烷液（3.3）稀释并定容至50ml，配成浓度为 0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/ml标准系列溶液。

快速检测
1、 辣椒粉 取辣椒粉一小勺（约5g）放入小烧杯中，加入约40ml含20%丙酮的正己烷（3.3），摇动或搅拌2分钟，静置。取5 ml塑料注射器套管，下端口塞入小块脱脂棉，将事先处理好的氧化铝（3.1项）倒入注射器管中约3cm高，做成氧化铝固相萃取小柱，待样品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一废液杯，视颜色深浅倒入2-5ml，注意不要倒入太多，保证小柱的中下部仍为白色， 此时，含罗丹明B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的界面不清晰的宽带，然后用含20%丙酮的正己烷（3.3）20ml慢慢倒入小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移，可大部分被洗脱出，即可判断为含罗丹明B的可疑样品。

2、辣椒油 取辣椒油一小勺（约2g）放入小烧杯中，加入约10ml正己烷（3.2），混匀。按4.1项中“取5 ml塑料注射器套管，……即可判断为含罗丹明B的可疑样品。”操作。

3、 判定 初步判断为含罗丹明B的可疑样品需送实验室中进行液相色谱确证检验。

1、实验室检测方法，仪器是：高效液相色谱仪 （双泵、紫外/可见光检测器），色谱柱 C18 4.6mm X 15cm（5μm）

实验检测

2、提取和纯化， 辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷（3.3），震摇10分钟，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10ml含20%丙酮的正己烷（3.3）重复提取一次，合并2次提取液，混匀，用滴管将上清液加入氧化铝小柱（3.4）中[小柱预先用5ml提取液（3.3） 润湿]，视颜色深浅决定上柱量，保证上完样的小柱中下部仍为白色，含罗丹明B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，且粉红条带随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的不清晰的宽带，用含20%丙酮的正己烷（3.3）洗小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出，可判断为含罗丹明B的可疑样品，待洗柱的流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色谱仪进行确认。

3、辣椒油：称取辣椒油1g，加入10ml含20%丙酮的正己烷（3.3），混合均匀后滴入氧化铝小柱（3.4）中，按照5.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。

4、其它食品：对于使用了红辣椒油（粉）调味的食品（如红油豆制品、红油鱼干等）称取10-20g，用20%丙酮的正己烷（3.3）洗下红油（粉），或将样品与洗脱液搅成匀浆将罗丹明B溶解提取出，将样品液静置或离心，分出有机相，根据水分的多少加入适量无水硫酸钠脱水，按照5.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱，注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。含量少的样品因粉红色条带太窄和颜色较淡肉眼看不清楚，仍可采用上述办法，进一步用20%丙酮的正己烷（3.3）洗涤小柱至流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，经浓缩后，注入高效液相色谱仪进行确证检验。

5、液相色谱条件
5.1 色谱柱：C18 4.6mm X 15cm（5μm） 进样 5ul
5.2 流动相：75%甲醇水溶液 1ml/min
5.3 检测器: 紫外/可见光（UV/VIS）检测器；波长：550nm
5.4 定性定量：罗丹明B标准溶液保留时间定性，外标法定量。

5.4 结果计算

Y = C×V/M

Y——样品中罗丹明B的含量（mg/kg）
C——从标准曲线上查得的罗丹明B的浓度（ug/ml）
V——测试样品总定容体积（ml）
M——样品的称样量（g）

5.5 注意事项：①使用C18柱的性能有差异，流动相浓度应略作调整。②在本法所给分离条件下，样品基质在罗丹明B附近无干扰峰，其他许多红色偶氮染料均可在罗丹明B之后出峰，注意调整这些干扰峰与罗丹明B分离度，干扰的成分为：苏丹橙G、对位红、苏丹红7B、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ。

相关标准:　
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GB/T 20127.5-2006 钢铁及合金痕量元素的测定第5部分：萃取分离-罗丹明B光度法测定镓含量 Steel and alloy - Determination of trace element contents Part 5: Determination of gallium content by extraction separation-rhodamine B photometric method
GB/T 7731.8-2008 钨铁 锑含量的测定 罗丹明B光度法和电感耦合等离子体原子发射光谱法 Ferrotungsten - Determination of antimony content - The tetraethylrhodamine photometrie method and inductively coupled plasma-atomic emission spectrometry
YS/T 244.4-2008 高纯铝化学分析方法 第4部分 丁基罗丹明B光度法测定镓含量 Chemical analysis methods of high purity aluminum Part 4:Determination of gallium content by butylrhodamine B photometric method
YS/T 575.15-2007 铝土矿石化学分析方法 第15部分 三氧化二镓含量的测定 罗丹明B萃取光度法 Methods for chemical analysis of bauxite Part 15:Determination of gallium oxide content Rhodamine B-extraction photometric method
GB/T 20975.20-2008 铝及铝合金化学分析方法 第20部分：镓含量的测定 丁基罗丹明B分光光度法 Methods for chemical analysis of aluminium and aluminium alloys - Part 20：Determination of gallium content Butyrhodamine B spectrophotometric method
YS/T 981.5-2014 高纯铟化学分析方法 铊量的测定 罗丹明B吸光光度法 Methods for chemical analysis of high pure Indium--Determination of thallium content --RhodamineB spectrophotometric method
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94 碱性染料罗丹明B的通过二种不混溶溶剂的液体界面的离子转移 SUN ZHISHENG;汪尔康 CHINESE JOURNAL OF CHEMISTRY 1990 (1),21-28
95 一种新的测定痕量铁的分光光度法利用Fe(Ⅲ)对H2O2氧化还原型罗丹明B的催化效应测定铁 戴国忠;蒋治良;李昌雄 分析化学 1990 (1),39-41 ;图2表1参2.
96 以罗丹明B为指示剂催化动力学法测定痕量铜的研究 张志琪;马祥林 分析化学 1990 (6),520-524 ;图4表1参4
97 碱性染料杂多酸多元配合物显色反应的研究 VI. 丁基罗丹明B-砷钼杂多酸-聚乙烯醇-124体系 张红珍;许生杰 分析化学 1990 (8),710-714 ;图6表3参6
98 铱(III)-氯化亚锡-罗丹明B高灵敏显色反应的研究 ─浮选光度法测定铱 杨国祥;赵敏政;李振亚 分析化学 1990 (9),836-839 ;图4表1参6
99 超高灵敏显色反应及其应用的研究Ⅴ.钨(Ⅴ)-SCN-乙基罗丹明B-PVA-124体系 张红琴;许生杰 分析化学 1990 (11),987-991 ;图4,表2,参11
100 罗丹明B-硫氰酸钾分光光度法测定微量铜 杨季良 分析试验室 1990 (1),69