本品在定量时含胞苷-5’-磷酸二钠(C9H12N3Na2O8P)97~102%。
1.性状
本品是无色~白色的结晶或白色的结晶性粉末,有特殊的味道①。
2.鉴定试验
(1)取本品20mg,加0.01mol/L盐酸定容至100mL,取10mL,加0.01mol/L盐酸定容至100mL的溶液在279±2nm外有极大吸收峰②。
(2)取本品的水溶液(3→10,000)3mL,加盐酸1mL和溴试液1mL,在水浴上加热30min后吹入空气,除去溴,加5-甲基苯二酚的乙醇溶液(1→10)0.2mL,然后加硫酸铁铵盐酸试液3mL,水浴上加热20min呈绿色③。
(3)取本品的水气液(1→20)5mL,加镁试液2mL,不生成沉淀,但再加硝酸7mL,煮沸10min后,加氢氧化钠试液使其中和,呈磷酸盐的常规鉴定试验反应④。
(4)本品呈钠盐的常规鉴定试验反应⑤。
3.纯度试验
(1)溶解性 将本品0.5g溶于10mL水时是无色的,其浊度基本在规定的透明度以下。
(2)酸碱性 本品的水溶液(1→20)的pH值用玻璃电极法测定时,应是8.0~9.5。
(3)铵盐 将本品0.1g装入小试管中,加氧化镁50mg和水1mL,在试管内挂好用水润湿的红色石蕊试纸,封盖试管口,在水浴上加热5min,石蕊试纸不应变蓝⑥。
(4)钾 将本品1g溶于5mL水,以此为检液,进行砷的常规试验时,应符合要求⑦。
(5)重金属 将本品1g装入坩埚中,加硫酸铵1g盖住本品,然后加入水0.5mL,静置,加热进行炭化,不发生白烟后,进行强热、灰化。加硫酸、硝酸各3滴,徐徐加热灰化,冷却后在残留物中加稀醋酸2mL,和水至50mL,必要时可进行过滤,将此液作为检液,进行重金属试验时,其量应在0.001%以下⑧。
(6)氨基酸 取本品水溶液(1→1,000)5mL,加茚三酮试液1mL,加热3min时不应呈色⑨。
(7)吸光度比 测定本品的0.01mol/L盐酸溶液(1→50,000),在波长250nm,260nm和280nm外的吸光度为A1、A2和A3。A1/A2应是0.4~0.52,A3/A2应是1.85~2.2⑩。
(8)其它核酸分解物 可用“5’-肌苷酸钠”的纯度试验(8) 。
4.水分
精确称取本品500mg,进行水分的定量时,其量应在26%以下。但是,需将试样装入干燥滴定用容量瓶中,加费歇尔滴定法用甲醇10mL、密封、放置1h后,加一定量费歇尔试液(约10mL)使其过剩约10mL,密封,混合振荡5min后,边激烈振荡,边用水、甲醇标准溶液滴定。另外可用同样方法进行空白试验。
5.定量法
精确地称取本品500mg左右,溶于0.01mol/L盐酸,定容至1,000mL,取10ml/L盐酸,定容至1,000mL,取10mL,加0.01mol/L盐酸,定容至250mL,作为检液。0.01mol/L盐酸做为对照,用液层厚1cm于波长280nm处测定检液的吸光度,根据下式可求出胞苷-5’-磷酸二钠的含量 。
注 解
①本品易溶于水,微溶于甲醇,几乎不溶于乙醇。本品的呈味力与嘌呤核苷酸相比非常弱。
②是根据紫外吸收光谱来确认。本品的0.01mol/L盐酸溶液显示在λmax:279±2nm处有吸收,其分子吸光系数为12,700。胞苷和本品有相同的紫外吸收光谱。
③本品与嘌呤核苷酸不同,只在盐酸中加热不能使核糖游离,因此有必要利用溴试验进行处理,将碱部分分解使核糖容易游离(同5’-核糖核苷酸钠)。
④⑤(同5’-核糖核苷酸钠)。
⑥NH3的检测界限约20μg。
⑦AS2O3为1ppm以下。
⑧Pb为10ppm以下。
⑨检测界限1μg。
⑩把混入的其它紫外线的吸收物质加以规定。
本品的Rf值是0.1g胞苷和胞嘧啶是0.67和0.75,确认限度分别为0.1μg。
144.6是ε:12,700,由试样的检液浓度0.02g/L的吸光度,到含量(%)的变换系数。