用碘化铋钾进行益母草中水苏碱鉴别的研究

    摘要:目的:制定益母草中水苏碱的薄层鉴别方法:方法:采用不同的展开系统、不同的显色剂对益母草中水苏碱进行分离和显色，以考察其分离度和显色的稳定性。结果:以丙酮一无水乙醇一盐酸(5:3:0.5)为展开剂分离度为佳，在先喷10%硫酸乙醇后，以碘化铋钾一碘化钾碘(1:1)的混合试液显色灵敏度最高。结论:该方法可作为水苏碱的薄层鉴别方法。

 关键词:益母草 水苏碱 薄层色谱 鉴别方法

 益母草为妇科的常用中药， 主要含有水苏碱、 益母草碱、益母草定、益母草宁等生物碱类成分，均为药材的有效成分。中国药典2000年版一部益母 草项下收载了雷氏盐剩余比色法测定总生物碱量 的定量方法(以水苏碱为对照)。测定水苏碱的方法 有薄层扫描法 ’ 、高效液相色谱法H)、高效毛细管 电泳法 等。但现有文献中水苏碱TLC方法的展开 时间长、显色的检测灵敏度差，本研究旨在寻找⋯ 种对水苏碱快速且灵敏度高的检测方法。试验方法 如下:

 1 仪器与试剂

 仪器有岛津CS一930双波长薄层扫描仪(日本)、PBQ·I型薄层自动铺板器(重庆)、自动喷雾显色仪(日本)，试剂有盐酸水苏碱对照品(批号: 712·9403，含量测定用， 中国药品生物制品检定 所)、硅胶G(青岛海洋化工厂)，所用试剂均为AR 级。，益母草药材购于江西省医药公司。

 2 供试品溶液的制备

 2.1 益母草供试品溶液的制备 称取益母草药材 粉末2g，加乙醇30mL，加热提取lh，放冷，滤过，滤 液蒸干，残渣加无水乙醇2mL溶解，作为供试品溶 液。

 2.2 盐酸水苏碱对照品溶液的制备 取盐酸水苏 碱对照品适量，加无水乙醇制成1.Omg／mL的对照 品溶液。

 3 薄层层析条件的选择

 分别以氯仿一丙酮一甲酸(8:2.5:2.5)、甲醇一 氯仿·甲酸(7:1:1)、正丁醇一盐酸一水(4:l: 0.5)、丙酮·无水乙醇一盐酸(10:6:1)为展开剂， 结果前两者供试品仅显一个斑点，后二者显两个斑 点，且以丙酮一无水乙醇一盐 (10:o:1)分离度较理想，斑点圆整、集中。

 4 显色剂的选择

 精密吸取对照品溶液2、4、8、l2、l6 uL，点于同 一块硅胶G薄层板上， 以丙酮一无水乙醇一盐酸 (10:6:1)展开后，分别用以下显色剂进行显色。

 碘化铋钾试液(a)、稀碘化铋钾试液 )、改良碘 化铋钾试液(c)、改良碘化铋钾一1%-氯化铁无水乙 醇(5:1)混合液(d)、碘化铋钾一碘化钾碘(1:1) 试液(e)、稀碘化铋钾一碘化钾碘(1:1)试液(f)。

 结果:a的用量较大，显色时间长，6uL以上者 叮显色，但稳定性差；b4uL以上的斑点清晰，稳定 性尚可；c、d 显色剂用量大，6 L以上斑点清晰可 见，但斑点颜色较淡，底色也较淡；e、f显色斑点颜 色深、清晰可见，如先喷10%硫酸乙醇后，再喷该两 种显色剂则可提高显色灵敏度，e的灵敏度可达 2 uL f可达4此。以上显色剂的灵敏度(斑点颜色 由深到浅):e> b>c>d>a。

 5 稳定性考察

 5.1 测定波长及主要扫描参数的选择分别对盐 酸水苏碱对照品及供试品斑点，在370～700rim 内 扫描，结果供试品与对照品光谱图一致，在510rim 处有最大吸收。确定入=510rim，SX=3，狭缝1.2x 1.2mm，双波长反射锯齿形扫描。

 5.2 稳定性实验吸取供试品溶液4uL，对照品溶 液4 uL，点于同一硅胶G薄层板上，展开，显色，每 隔30min测1次，连续测2h，结果见表1。

 表1 显色稳定性测定结果


注: =124 540.8， RSD=I.93% 。

 在2h内峰面积值基本保持不变。而中国药典的显色条件，其斑点颜色在30min内即完全消失。

 6 讨论

 6.1 生物碱与生物碱沉淀试剂的反应需在酸性溶液中形成离子状态才能进行，水苏碱属季胺型生 物碱，碱性较强，要使水苏碱成离子状态则需要较 强的酸性；而在TLC显色中酸性均较弱，因而，像小 檗碱、水苏碱等季胺型生物碱和苦参碱等碱性强的 生物碱，存在不易显色且显色不稳定现象。本实验 中，喷10%硫酸乙醇后再喷显色剂e、 可明显提高 显色灵敏度和稳定性，可能与这一特性有关。

 6，2 本实验中采用氯仿一丙酮一甲酸、甲醇-氯仿一 甲酸、丙酮一无水乙醇一盐酸为展开剂，展开均只需 20~30rain，而中国药典中使用的正丁醇一盐酸一水 则需近2h，且样品分离度较丙酮一无水乙醇一盐酸 差。另以甲醇一氯仿一甲酸展开时样品中仅显一个 斑点(内含多种生物碱)，因而，在进行益母草提取 工艺优选时可选用该展开剂测定总生物碱；而进行水苏碱含量测定时则可选用丙酮一无水乙醇-盐酸 为展开剂，样品中显两个斑点，且展开时间短，分离 效果好。