四氮唑比色法。皮质激素类的C17位的α-醇酮基具有还原性．在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲噆(formazan)，后者在可见光区有最大吸收。

1、原理。该反应在一定条件下可定量完成，且生成的有色甲臜具有一定的稳定性，可用于甾体激素类药物的含量测定。

2、最常用的四氮唑盐有两种。
(1)2,3,5-三苯基氮化四氮唑(2,3,5-triphenyltetramlium chloride，缩写为TTC)，简称为氯化三苯四氮唑或红四氮唑(red tetramline，RT)，其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲簪，在480~490nm波长处有最大吸收。氯化三苯四氮唑显色灵敏度较低，但空白吸收较小。
(2)蓝四氮唑(blue tetramline，BT)，即3,3’-二甲氧苯基-双4,4’-(3,5-二苯基)氮化四氮唑{3,3’-dianisole-bis[4,4’-(3，5-diphenyl)tetramlium chloride]}，其还原产物为暗蓝色的双甲簪，在525nm波长处有最大吸收。

3、应用示例。
以中国药典收载的醋酸氢化可的松软膏的含量测定为例，测定方法如下：

a对照品溶液的制备
精密称取醋酸氢化可的松对照品25mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

b供试品溶液的制备
精密称取本品2.5g(相当于醋酸氢化可的松25mg)，置烧杯中，加无水乙醇约30ml，置水浴加热使溶解，再置冰水中冷却，滤过，滤液置100ml量瓶中，如此提取3次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

c测定
精密量取对照品溶液与供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液(取氯化三苯四氮唑lg，加无水乙醇使溶解成200ml)lml，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液(取10%氢氧化四甲基铵溶液lml，加无水乙醇使成10ml)1ml，摇匀，在25℃的暗处放置40~45分钟，照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。