5-甲基尿苷液相检测方法
1 试验仪器、试剂
a) 试验仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）；
b) 记录仪：色谱工作站；
c) 乙腈：色谱纯；
d) 磷酸二氢钾：分析纯；
e) 磷酸：分析纯。
2 试验条件
a) 色谱柱：Agilent Extend-C18，250×4.6mm，5μm 或类似柱；
b) 检测波长（UV）：254 nm；
c) 流动相：乙腈、0.01M KH2PO4溶液（用稀磷酸调 pH3.0）；
d) 梯度：
时间 乙腈 0.01M KH2PO4 (pH=3.0）
0 6 94
4 6 94
9 20 80
13 20 80
13.1 6 94
16 6 94
e) 流速：1.0mL/min；
f) 柱温：30 ℃；
g) 进样量：10μL；
h) 溶剂：乙腈–水（10:90）。
3 试验准备
精密称取40mg对照品于100ml容量瓶中，用溶剂溶解，定容至刻度，混匀，配制两份；
精密称取20mg供试品于50ml容量瓶中，用溶剂溶解，定容至刻度，混匀，配制两份。
4 样品分析
进样溶剂，检查基线飘移、噪声等其他系统信号干扰。
样品按下列次序进样：
批号 溶液名称 针次
对照品 第 1 份对照溶液 1
第 2 份对照溶液 1
样品 1 第 1 份供试溶液 1
第 2 份供试溶液 1
样品 2 第 1 份供试溶液 1
第 2 份供试溶液 1
… …
技术指标9的测试方法文件对照溶液峰面积与称量的比值A/W（Area/mg）的相对标准偏差RSD不得超过0.5%。
同一批供试溶液的2次进样所得含量的相对标准偏差RSD不得超过0.5%。
5 色谱纯度
按面积归一法：总杂质=单个杂质之和。
6 含量
公式如下：
  AS×WR×VS 100×PR
甲基尿苷（%）=-----------------------×--------------------
AR×WS×VR 100-L

AS——供试溶液5-甲基尿苷的峰面积；
AR——对照溶液5-甲基尿苷的峰面积；
WR——配制对照溶液时，5-甲基尿苷对照品的称量，mg；
WS——配制供试溶液时，5-甲基尿苷供试品的称量，mg；
VS——配制供试溶液时，容量瓶的体积，ml；
VR——配制对照溶液时，容量瓶的体积，ml；
PR——5-甲基尿苷对照品的含量，%；
L——5-甲基尿苷供试品的实测干燥失重，%。