由3,4-亚甲基二氧基苯甲醛经下列步骤制得。将新处理过的五氯化磷分次加入3,4-亚甲基二氧基苯甲醛中，开始时反应很剧烈，需用冰水冷却，同时应防止湿气侵入。大约在加入一半五氯化磷后应变慢，可不再冷却。
五氯化磷的用量为3,4-亚甲基二氧基苯甲醛的3倍（摩尔）。将所得反应液慢慢加热1h，放出氯化氢，再减压抽出挥发物。然后，将反应物倾入冷水中，析出的乳状油层放置固化。再慢慢沸腾3h，加活性炭过滤，滤液减压浓缩，冷却至0℃，析出结晶。过滤、水洗后用水重结晶，得成品。
复方丹参含片中原儿茶醛含量的测量不确定度分析
测量不确定度是“表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相关联的参数”，它是被测量客观值在某一量值范围内的一个评定，不确定度越小，测量结果的质量越高，使用价值越大。测量不确定度对实验室问比对，测量结果临界值的判断，方法的确认以及检测工作国际化等方面，都有重要的意义。本文根据《测量不确定度评定与表示》(JJ— F1059—1999)、《化学分析测量不确定度评定》 (JJF1135-2005)和《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS—GL06：2006)中有关规定对复方丹参含片中HPLC法测定原儿茶醛含量的测量不确定度进行了分析，以期找出影响不确定度的因素，对不确定度进行评估，为评价检测报告提供科学依据。
1 仪器与试药
HP1100型系列高效液相色谱仪(美国)，包括G1322A在线脱气，G1311A四元梯度泵、G1316A柱温箱、G1315B二极管阵列检测检测器；AE-240电子分析天平(瑞士Mettler)；KQ-250B型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。
原儿茶醛对照品(批号110810-200506，购于中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯(德国Mer— ck)；水为超纯水(韩国Power Iplus超纯水系统)，其余试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2(4.6 mill×200 mm，5 )；流动相：甲醇一1％冰醋酸=15：85；检测波长： 280 Bin；流速：1.0 ml_／min。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000。
2.2 对照品溶液的制备
取原儿茶醛对照品约1O mg，精密称定，置5O mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加50％ 甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入50％ 甲醇25 mL，称定重量，超声处理15 min，放冷，再称定重量，用50％ 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2O ，注入液相色谱仪，测定，利用外标法计算含量。
3 不确定度分析
化学分析中测量不确定度的评估过程主要有以下几个步骤 4。：被测量量的技术规定；确定和分析不确定度来源；量化不确定度；合成标准不确定度的计算；扩展不确定度的给出；报告测量结果及不确定度。下面按这几个步骤对本次实验的测量不确定度进行评定和表示。
3.1 被测量量的技术规定
主要说明被测量量，建立数学模型。本法为外标法测定样品中原儿茶醛成分的含量，其数学模型为(假设直线过原点)： P： 等 ×F×1000[mr／)~f] 式中，P为样品中原儿茶醛的含量mr／片；As为样品的峰面积响应值；Mr为对照品的取样量g；为样品溶液的体积mL；Ar为对照品的峰面积响应值；Ms为样品的取样量g；Vr为对照品溶液的Ar；W 为平均片重g；F为样品非均匀性校正因子系数，值为l；1000：g换算为mg。
3.2 识别和分析不确定度来源
3.2.1 质量(M)
样品和对照品的质量皆由增量法称量给出。称量不确定度主要来自3个方面：①称量的重复性，可以通过多次重复测量读数，计算得出，属A类不确定度；②天平称量最大允差引入的不确定度，属B 类不确定度；③ 校准产生的不确定度，属B类不确定度。
3.2.2 体积(V)
容量瓶与移液管中的溶液体积主要有3个不确定度来源：① 重复性，溶液充满容量瓶(或移液管) 至刻度的变化，属A类不确定度，可通过多次测定而得；②容量瓶允差，确定容量瓶内部体积时的不确定度，属B类不确定度；③温度系数引起的不确定度，属B类不确定度，由于本文中测定温度为20 ℃ ，与校准时温度一致，故此项可忽略。
3.2.3 HPLC峰面积响应值
主要由峰面积重复性与仪器环境、进样体积等其它因素的不确定度共同引起。峰面积重复性为A 类，可通过多次测定而得；仪器环境、进样体积等的其它因素引起的不确定度为B类，由于对照品与供试品峰面积是在相同条件下测得，所以此项忽略。 3.2.4 样品均匀性
即样品测量的重复性，样品的研磨和取样会影响含量测定结果的差异，其产生的不确定度可以通过多份样品的含量测量来求得，为A类不确定度。
3.2.5 对照品纯度
对照品原儿茶醛购自中国药品生物制品检定所，由于尚无法得到不确定度参考值，故此项忽略。不同的因素及其影响见图1。
3.3 不确定度分量的量化
3.3.1 Mr对照品的取样量为0.01049 g，对照品称量的不确定度U(Mr)=0.015 mg，相对不确定度U (Mr)=O.015 mr／10.49 mg=0.00143。
3.3.2 Ms样品的取样量为0.4000 g，样品称量的不确定度u(Ms)=0.15 mg，相对不确定度U (Ms) = 0.15 mg／400 mg=0.000375。
3.3.3 Vs样品溶液体积的不确定度，25 mL单标线移液管的不确定度U(VS)=0.005 mL，相对不确定度U (VS)=0.005 mL／25 mL=0.0002。
3.3.4 Vr对照品溶液体积的不确定度，50 mL容量瓶定容两次，50 mL容量瓶体积的不确定度U (Vr1)=0.005 mL，相对不确定度U (Vr)=0.005 mL×2／50 mL=0.0002；5 mL单标线移液管体积的不确定度u(Vr2)=0.0025 mL，相对不确定度U (vr2)=0.0025 mL／5 mL=0.0005。对照品溶液体积的相对合成不确定度为：U (Vr) =0.0002 +0.0005 =2.9×10一，u (Vr)=0.000539。 3.3.5 As通过测定峰面积多次，计算样品峰面积平均值为4199，峰面积不确定度U(As)=8.356，其相对不确定度为u (As)=8.356／4199=0.00199。 3.3.6 Ar通过测定峰面积多次，计算对照品峰面积平均值为1745，峰面积不确定度U(Ar)=3.507，其相对不确定度为u (Ar)=3.507／1745= 0.00201。
3.3.7 w称取2O片，得平均片重0.4034 g，平均片重的不确定度u(W)=0.00184 g，相对不确定度u (W)=0.00184 g／0.4034 g=0.00456。
3.3.8 F依照“2.3”项下方法平行配制三份样品溶液，分别进行测定，计算样品重复性不确定度u= 0.009 mg，相对不确定度U =0.009 mg／1.273 mg= 0.00707，F相关不确定度据此折换为u(F)=U (F) = 0.00707。
各数值和不确定度见下表。
3.5 扩展不确定度的给出
取置信概率为95％ ，包含因子k=2，将相对合成标准不确定度乘以包含因子得到相对扩展不确定度，u(P)=0.01l×2=0.022 mg。
3.6 报告测量结果及不确定度
复方丹参含片中原儿茶醛的含量为：P= (1.273-I-0.022)mg，其中“±”后的数是扩展不确定度U=ku(P)，由u(P)=0.011 mg和k=2确定k= 2是根据置信概率为95％ 由t分布确定的。
4 讨论
4.1 考虑到样品的不均匀性，在计算公式中加人了均匀性因子，其作用是将样品不均匀性产生的不确定度带人公式，而与计算结果无关，所以设其值为1。
4.2 对图2的分析表明，样品均匀性，片重差异和高效液相色谱仪的性能引人的不确定度较大，为不确定度的主要来源，其中样品均匀性影响最大，因此在分析测定时应加以严格控制，充分研磨样品并混合均匀。
4.3 本文提供了一种检测结果测量不确定度计算的方法和思路，可以推广用于液相色谱法测定成分的含量，分析引入的分量，找出影响较大的因素并在以后的实验中加以注意和改进，以期得到高质量的测量结果。