N-甲基吡咯烷气相色谱检测条件

方法提要：一定量的样品进入色谱仪汽化室后，随载气进入色谱柱，在流经色谱柱的过程中各组分分离，然后进入检测器，检测信号输到色谱工作站，由色谱工作站处理结果。

检测条件：
汽化温度：160℃

检测温度：170℃

检测器：氢火焰检测器（FID）

柱温：60℃

色谱柱：毛细管柱30m×0.53mm×0.5μm SE-30

载气：氮气，流速50ml/min

氢气：流速，50 ml/min
空气：流速，50 ml/min
进样量：0.04μL

结果计算：面积归一法。
误差：二次平行试验结果差的绝对值不超过0.1%。

附：气相色谱法测定头孢吡肟中N--甲基吡咯烷杂质含量

【摘要】 目的 用气相色谱法测定盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷杂质含量。 方法 采用毛细管气相色谱法，氢火焰离子化检测器（FID），弹性石英毛细管柱HP-1（60m×0.53mm，5μm）;柱温100℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为氮气;进样量1μl;分流比为10∶1。 结果 N-甲基吡咯烷浓度在1.1213～134.56μg/ml时线性关系良好，线性方程:A 吡咯烷 /A内标 =0.01561C-0.00854，相关系数r=0.99998;RSD（%）=0.00486。加样回收率101.73%;检测限0.6ng。 结论 本法简便、准确、适用性广，便于在生产过程中进行监控。

【关键词】 气相色谱法

　　头孢吡肟（cefepime）为第四代广谱头孢菌素，它对革兰阴性菌，特别是肠杆菌、铜绿假单胞菌有良好活性，同时保持了对革兰阳性菌的作用，临床广泛用于防治多种细菌感染性疾病 ［1］ 。

头孢吡肟母核3位侧链上的一个基团为N-甲基吡咯烷（N-methylpyrrolidine，NMP），其四价氮正离子与4位侧链羧基形成分子内盐结构，可提高水溶性，增强抗菌作用，但N-甲基吡咯烷有可能从头孢烯骨架上分解，造成残留，故须对头孢吡肟中的N-甲基吡咯烷残留量进行检测。文献［2］采用气相色谱法，顶空进样进行测定，由于头孢吡肟在受热条件下会降解产生NMP，使测定结果偏高;此外，残留的头孢吡肟有可能吸附NMP，使得进样后NMP不出峰。本文采用氯仿 提取、直接进样的方法测定盐酸头孢吡肟中NMP的含量，方法普及性强，测定方便，色谱峰稳定，峰形美观，检测灵敏。

　　1 仪器和试药
HP-4890气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID）;盐酸头孢吡肟（批号:010703、010801、010802）为广州白云山化学制药厂试制。N-甲基吡咯烷为化学纯，ACROS Organics，Inc.97%，批次A018227401;吡啶，化学纯，天津市永大化学试剂开发中心，99.5%;氯仿、二氯甲烷、乙醇、丙酮均为分析纯。

　　2 色谱条件
色谱柱为弹性石英毛细管柱HP-1（60m×0.53mm，5μm）;柱温100℃;气化室温度250℃;检测器温度250℃;载气为氮气;进样量1μl;分流比为10∶1。

　　3 方法与结果

　　3.1 溶液的配制
内标溶液 取吡啶约0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。

对照品溶液 取N-甲基吡咯烷约0.1g，精密称定，置100ml容量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液与内标溶液各5ml，置100ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀。供试品溶液 取盐酸头孢吡肟约0.2g，精密称定，置研钵中，加氯仿2ml，在通风橱内研磨3min，用氯仿分次转移至10ml容量瓶中，精密加入内标溶液0.5ml，并用氯仿稀释至刻度，充分振摇，滤过，取续滤液。

　　3.2 专属性
盐酸头孢吡肟合成过程中使用的溶剂包括有乙醇、丙酮、二氯甲烷，分别取N-甲基吡咯烷、吡啶、丙酮、乙醇、二氯甲烷各约0.1g，置同一100ml容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，摇匀，精密量取1μl注入气相色谱仪，记录色谱图。结果表明，乙醇、丙酮、二氯甲烷、吡啶与N-甲基吡咯烷的分离度符合系统要求，相对保留时间（RRT）依次为:乙醇（0.76）、丙酮（0.79）、二氯甲烷（0.86）、氯仿（1.00）、N-甲基吡咯烷（1.25）、吡啶（1.50）。

3.3 标准曲线的制备及结果
精密量取对照品贮备液0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0与12.0ml，分别至100ml容量瓶中，各精密加入内标溶液5ml，加氯仿稀释至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪，记录色谱图。以N-甲基吡咯烷浓度为横坐标，以A 吡咯烷 /A 内标 为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为:A吡咯烷 /A 内标 =0.01561C-0.00854，r=0.99998。

N-甲基吡咯烷浓度在1.1213～134.56μg/ml范 围线性关系良好。

3.4 精密度和检测限
精密量取对照品贮备液3.0、5.0与7.0ml，分别置100ml容量瓶中，各精密加入内标溶液5ml，加氯仿稀释至刻度，摇匀，取1μl注入气相色谱仪，每个浓度分别连续进样6次，以测得的N-甲基吡咯烷峰面积与内标峰面积的比值计算RSD，结果为0.51%。

上述色谱条件下，N-甲基吡咯烷最低检出限为0.6ng（S/N=3）。

　　3.5 回收率
精密称取已知NMP浓度的样品9份，各约0.2g，置研钵中，加入氯仿2ml，在通风橱内研磨3min，用氯仿分次转移至10ml容量瓶中，各精密加入内标溶液0.5ml，分别精密加入对照品贮备液0.3、0.5与0.7ml，并用氯仿稀释至刻度，充分振摇，滤过，量取续滤液1μl，注入气相色谱仪，按内标法以峰面积计算。该法的加标回收率为101.73%。

　　3.6 样品测定
批号为010703、010801和010802的样品中NMP含量分别为0.009%、0.003%和0.006%。

4 结论本法采用氯仿提取、直接进样的方法测定头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量，该法专属性强，精密度良好，回收率高，可用于检查盐酸头孢吡肟中N-甲基吡咯烷的含量。该法色谱峰稳定，峰形美观，检测灵敏，普及性强。