原儿茶酸检测方法
高效液相色谱法测定补血调经片中原儿茶酸的含量
补血调经片是由鸡血藤、阿胶、岗稔子、肉桂、党参等l8味中 药组成，具有补血理气、调经的功效，用于妇女贫血、面色萎黄、赤 白带下、经痛、经漏、闭经等症。其处方组成比较复杂，鸡血藤为 方中君药，其功能主治为补血，活血，通络。用于月经不调，血虚 萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛。与该产品的功能主治密切相关，本实 验以其所含有效成分之一原儿茶酸为指标，采用高效液相法测定 方中的原儿茶酸的含量。
1 仪器与试药
岛津LC一20A高效液相色谱仪；SPD—M20A二极管阵列检 测器；岛津uV一2550紫外分光光度计；Mettler PB303一N电子分 析天平(准确度：1 mg)；Mettler AE一160电子分析天平(准确： 0.1 mg；Mettler AG一135电子分析天平(准确度：0.Ol mg)； HS10260D型超声清洗器。原儿茶酸对照品(批号：110809— 200102)由中国药品生物制品检定所提供，乙腈为色谱纯，甲醇、 磷酸均为优级纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择用紫外分光光度计对对照品溶液在200 ～ 400 nm波长范围进行扫描，结果在260 nm波长处具有最大吸 收。故选择260 nm作为测定波长。
2.2 对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品适量，加 50% 甲醇溶液制成每毫升含16 g的溶液，即得。
2.3 样品提取方法的考察
2.3.1 醋酸乙酯提取法精密称取本品2 g，加入0.2%盐酸1ml湿润，加入醋酸乙酯50ml，称定重量，超声提取(250W，40kHz)25 min，放置至室温，加醋酸乙酯补足减失的重量，摇匀，过 滤，取滤液25ml，蒸干，残渣加50% 甲醇溶解，定量转移至25 mI 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3.2 甲醇溶液提取法精密称取本品2 g，加入50% 甲醇溶 液50ml，称定重量，超声提取(250W，40kHz)30 min，放置至室 温，加50%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即得。
结果，醋酸乙酯提取法提取产物较甲醇提取法所提的产物的 色谱峰分离清晰，用二极管阵列检测器检测，醋酸乙酯提取法所 提产物的峰纯度高，三点法相似度在0.999以上，故采用选择方 法醋酸乙酯提取法。
2.4 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，精密称 取2 g，按“2.3.1”方法提取原儿茶酸提取液样品。
2.5 色谱条件色谱柱为Alhima HP c (250 am×4.6 mm，5 m)；流动相为乙腈一0.2%磷酸(4：96)；柱温40℃ ；流速0.7ml/min；测定波长260 nm。进样量l0 l。对照品、供试品溶液与 鸡血藤药材提取液的色谱图如图1—3。
供试品溶液理论踏板数为14 601，结合本法具体情况，暂定 其理论板数按原儿茶酸峰计算，应不得低于5 000。
2.6 阴性对照实验为进一步考察实验设计的合理性，按原处 方工艺制成不含鸡血藤的阴性对照样品，按“2.5”项下方法测 定，阴性对照样品如图4。由图4可以看出阴性对照色谱中，原儿茶酸峰位置无干扰峰，证明本法是合理可行的。
2.7 标准曲线的绘制取原儿茶酸对照品适量，加50% 甲醇溶 液制成16g/m的溶液。精密吸取上述溶液1，3，5，7，10 Ixl进 样，HPLC测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准 曲线。曲线回归方程为Y：6 368.46X一5.59(r=0.999 99)。表 明进样量在0.016 5—0.165 g内，呈良好的线性关系。
2.8 方法学考察
2.8.1 精密度实验取同一供试品溶液10 l，连续进样5次。 结果见表1。结果表明，方法具良好的精密性。
2.8.2 稳定性实验取同一供试品溶液10 l，分别在0，2.5，6， 9，12 h，照“2.5”项下方法测定峰面积，结果如表2。由表2可以 看出，峰面积RSD为0.68% ，表明峰面积变化很小，原儿茶酸在 12 h内基本稳定。
2.8.3 重复性实验取同一供试品5份，按“2.5”项下方法独立 测定。结果见表3。RSD为1.65% ，结果表明，本法重复性良好。
2.8.4 回收率实验称取5份已知含量约1 g样品(含量：0.10 rag/片)，精密加入原儿茶酸对照品溶液(0.116 7g/m1)1ml，挥 干，按“2.5”方法测定，计算回收率，结果见表4。如表4所示，测 得的平均回收率分别为99.56% ，RSD=0.39% ，结果表明，该方 法具有很好的回收率。
2.9 样品测定及限度要求按“2.5”项下的方法测定样品3 批。结果见表5。如表5所示，3批样品的平均含量为0.10 mg/ 片；按照“2.5”色谱条件测定投料用鸡血藤药材，平均含量为 0.044%。考虑到药材的波动及煎煮过程中的损失，暂定每片含 鸡血藤以原儿茶酸(C，H O )计，不得少于0.08 mg
2.10 原料药材的测定结果取投料用鸡血藤药材0.8 g，照正 文方法实验。结果见表6。
3 讨论
本文采用HPLC法测定补血调经片中原儿茶酸含量，本方法 简便，准确，精密度高，重复性好，能够有效地控制补血调经片的质量。