本品在100℃干燥3h后,进行定量时,含氮(N=14.01)14.7~16.0%①。
1.性状
本品为白~淡黄色的粒、粉末或片状,无味、无臭、或者略带有特殊的香气和味②。
2.鉴定试验
(1)取本品0.1g,加氢氧化钠试液10mL,溶解加醋酸调成弱酸性时,生成白色的絮状沉淀③。
(2)取本品0.1g,加氢氧化钠试液10mL,溶解,再加1滴硫酸铜试液,摇晃混合,生成蓝色沉淀,液体呈紫色④。
(3)取本品1g,加水5mL,摇晃混合后,加硝酸汞试液10滴和亚硝酸钠试液1滴,在水浴上加热3min,膨润的本品表面呈红褐~红紫色⑤。
(4)将本品0.1g强热时冒烟,生成特异的臭气。当烟不发生后,停止加热,放冷后,在黑色的残留物中,加稀硝酸5mL,加温过滤,在滤液中加钼酸铵试液1mL,再加温,生成黄色的沉淀⑥。
3.纯度试验
(1)溶解性 将本品用减压干燥器(硫酸)干燥4h后,形成微细的粉末,取其0.1g,加水30mL摇晃混合,约放置10min后,加0.1mol/L氢氧化钠溶液2mL,时而进行晃动,在60℃加温1h使其溶解,冷却后加水至100mL时,无色,其浊度应是微温以下⑦。
(2)酸碱性 在1.5g本品中,加水30mL,摇晃混合10min后过滤,其滤液的pH值用玻璃电极法测定时应是3.7~6.5⑧。
(3)水可溶物 取(2)的溶液20mL,在水浴上蒸发干固,在100℃干燥到恒量为止,其量应在10mg以下⑨。
(4)脂肪 精确称取本品约2.5g,加稀盐酸(27→40)15mL,用直火缓慢加热使其溶解后,在水浴中加热20min。冷却后加乙醇10mL,移到抽提管中,加乙醚mL,激烈振荡1min,然后加石油醚25mL,激烈振动30s后,放置。将从侧枝管(A)(如图2),取出的上层液用干燥滤纸过滤,然后把滤液装入重量已知的烧瓶中。然后用15mL乙醚和15mL石油醚,进行2次同样抽提。将上层液合并到上述的烧瓶中,在水浴上馏去乙醚和石油醚。将残留物在98~100℃干燥4h,其量应在1.5%以下⑩。
(5)砷 将本品2.5g装入分解烧瓶中,加硝酸10mL,用弱火加热至抽出管内容物成流动状停止。冷却后加硫酸5mL,再加热,溶液呈褐色时进行冷却,追加过氧化氢5mL后加热。此操作返复进行至无色~淡黄色,加热至液体发生白烟时停止。冷却后,加饱和草酸铵溶液15mL,再次加热至发生白烟时停止。冷却后,加水至25mL,取其10mL做为检液进行砷的常规试验,应符合要求。但是标准色为取砷标准溶液25mL装入分解烧瓶中,加硝酸10mL,以下操作同试样 。
(6)重金属 将本品2g缓慢加热碳化后,在不超越500℃下灰化,加盐酸2mL,在水浴上蒸发干固,将残留物溶解于4mL稀盐酸和20mL水中,过滤,滤纸上的残留物每次用5mL水洗3次,然后将洗液与滤液合并,加水至50mL。取其25mL做为检液进行重金属试验时,其量应在0.002%以下 。
4.干燥失重
本品在100℃干燥3h,其失量应在12%以下 。
5.强热残留物
本品在100℃干燥3h后,精确称取约1g,进行强热残留物试验时,其残留物应在2.5%以下 。
6.定量法
本品在100℃干燥3h后,精确称取约0.15g,根据氮定量法的凯氏定氮法定量 。
注 解
①酪蛋白是含磷的复合蛋白质,氮含量是15.51%。因此,氮含量乘100/15.68=6.38,可求出酪蛋白的含量。14.7~16.0%的氮含量相当于93.8~102.1%的酪蛋白。
②制品中含脂肪1.5%以下因此大多呈乳酪色。另外在生产过程中水洗不充分时会残留还原糖(乳糖),加热干燥时与酪蛋白发生氨羰基反应,成为褐变的原因。过度加热,也成不合格品褐变物,它有独特的天然香味。如呈酸腐臭味,奶酪臭味或金属臭味等特异的臭味可以判定不是优质品。
③本品不溶于水,溶解于碱溶液中。如有必要可加热,酪蛋白的等电点是pH值4.6,牛乳的酪蛋白在等电点沉淀。牛乳酸败时凝固正是这个道理,再加酸调成强酸性时再溶解。
④是缩二脲反应。是蛋白质,肽的呈色反应。
⑤是有酚性羟基的芳香族化合物共同的反应,可称为米隆反应。加米隆试剂(硝酸汞和亚硝酸钠),加热到60~70℃以上,变为砖色。酪蛋白含5.5%酪氨酸,所以本反应呈色显著。
⑥本品燃烧产生蛋白质特有的气味。本品由于是磷蛋白,其灰分的酸抽提液含有磷酸生成磷钼酸氨黄色沉淀。
⑦在JIS规定,试剂酪蛋白特级、1级几乎都是透明的。
⑧本品几乎不溶于水。但是当夹着酸时呈现酸性。所以对其要加以限定。
⑨做为水可溶物有酸类,乳糖,盐类等杂质。这些做为精制不良指标。限量是1%。
⑩酪蛋白中的脂肪包含在内部,如直接进行溶剂抽提也不能浸出。因此经盐酸加热分解后,用乙醚或石油醚抽提。本法称为施密特法,一般用于奶酪的脂肪定量。限量与食用酸酪蛋白的国际规定配合为1.5%。
利用硫硝酸的疏散法,加硝酸时,发生亚硝酸气体难以操作,使用过氧化氢时,添加次数是1~2次,在1.5h~2h就分解完了,大体可以缩短一半时间。
在500℃难以将黑色的碳化物碳化,得到完全白色的灰。Pb限量为20ppm,这是国际规格。
水分的多少与酪蛋白的保存,特别是与因霉菌等有害菌的污染而致的腐败关系密切,所以是重要的检查项目。食用酸酪蛋白的国际规格是12.0%以下,与本规格相同。关于试验法,国际规格为在100~104℃干燥到恒量;对此美国是100℃,干燥一夜;在英国、新西兰在102℃干燥4h;在日本的测定条件是100℃干燥3小时。
测定硫酸灰分。在强热残留物中也含有酪蛋白中的磷(P2O5)。
使用凯氏法,用直接蒸馏法定量氮,半微量凯氏法,得值稍低,所以不能令人满意。