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5-胞苷酸钠质量检测

非售品
CAS:6757-06-8
分子式:
分子量:

本品定量时含尿苷-5’磷酸二钠(C 9H 11N 2Na 2O 9P)97~102%①。
1.性状
本品为无色~白色的结晶或者结晶性粉末,略有特殊味②。
2.鉴定试验
(1)将本品20mg溶于0.01mol/L盐酸定容至100mL,取10mL,加0.01mol/L盐酸至100mL,其液在262±2nm处有最大吸收区③。
(2)取本品的水溶液(3→10,000)3mL,加盐酸1mL和溴试液1mL,在水溶上加热30min后,注入空气,除去溴后再加二羟基甲苯乙醇溶液(1→10)0.2mL,然后加硫酸铁铵盐酸试液3mL,在水溶上加热20min呈绿色④。
(3)取本品的水溶液(1→20)5mL,加镁试液2mL,不生成沉淀,然后加硝酸7mL煮沸10min后,加氢氧化钠试液,中和后的液体呈磷酸盐的常规鉴定试验反应⑤。
(4)本品呈钠盐的常规鉴定试验反应。
3.纯度试验
(1)溶解性 将本品0.5g溶于10mL水中,无色,其浊度应接近透明⑥。
(2)酸碱性 本品的水溶液(1→20)的pH值用玻璃电极法测定,应是7.0~8.5。
(3)铵盐 将本品0.1g装入小试管中,添加氧化镁50mg和水1mL,在试管内悬挂用水润湿的红色石蕊试纸,将口盖好,在水溶上加热5min,试纸不变蓝⑦。
(4)砷 将本品1g溶于5mL水中,以此为检液进行砷试验时,应符合要求⑧。
(5)重金属 取本品1g,加稀醋酸2mL和水20mL,溶解,以此为检液进行重金属试验时,其量应在0.001%以下⑨。
(6)氨基酸 取本品的水溶液(1→1,000)5mL,加茚三酮试液1mL,加热3min时,不呈色⑩。
(7)吸光度比 本品的0.01mol/L盐酸溶液(1→50,000)在波长250nm、260nm及280nm处,测吸光度A1、A2和A3时,应是A1/A2=0.7~0.8,A3/A2是0.34~0.42 *
(8)其他核酸分解物 将本品的水溶液(1→10)和乙二醇单甲醚的混合液(2:1:2)作为展开溶剂进行薄层层析时,只能确认一个斑点。但薄板用作为担体的微晶纤维素,是在60~80℃干燥20min后之物,展开溶剂的前端上升至比原线高10cm时,停止展开,风干后,在暗处紫外线(波长约250nm)下观察,不用对照液 *
4.水分
精确称取本品约500mg,进行水分定量时,其量应在26%以下。但是,需将试样装入干燥滴定瓶中,加费歇尔滴定法用试剂甲醇10mL,密封,放置1h后,加一定量的费歇尔试剂使其约过剩10mL,密封,搅拌5min后,边搅拌边用水-甲醇标准溶液滴定。另外,用同样的方法进行空白试验 *
5.定量法
精确称取本品500mg,溶于0.01mol/L盐酸至1,000mL,取10mL,加0.01mol/L盐酸至250mL,作为检液,用0.01mol/L盐酸为对照液,在液层厚1cm,波长260nm处测定检液的吸光度A,依据下式求出尿苷-5’-磷酸二钠的含量 。
注 解
①制品纯度当在99%以上,但由于用吸光度测定法定量,考虑仪器误差等,取下限值为97%,上限值为102%。
②本品约溶于2.5mL水中,难溶于甲醇,几乎不溶于乙醇。
③构成本品的尿密啶有紫外部吸收,可利用进行鉴定。
④是对与尿密啶结合,构成本品的核糖的鉴定,用溴使核糖游离后利用二羟基甲苯反应而鉴定。
⑤首先加镁试液,确认游离的磷酸盐不存在后,再与硝酸共同煮沸,加水分解,使磷酸盐游离,确认有机磷的存在。
⑥在精制过程中,可能有蛋白质及其它杂质残存,对此要进行试验。
⑦限制铵盐的混入,NH 4的限量是0.02%。
⑧在生产的最后阶段用氢氧化钠中和,可是在氢氧化钠中常常存在砷、所以限制了它的混入量,AS 2O 3的限量为1ppm。
⑨在制造时,由设备、容器等带入限量是10ppm。
⑩制造时混入、或者制成成品后混入,所以设此规定。
*限制肌芏酸、鸟苷酸、胞苷酸等亲缘化合物的混入,亲缘化合物的波长比如下表所示:
250nm/260nm
280nm/260nm
肌苷酸
鸟苷酸
胞苷酸
1.60
0.99
0.44
0.25
0.67
12.02
*在制造的同时生成的其它核酸,在精制阶段被除去,但还残存一部分。这些虽然在卫生上是无害的,为了确保质量而设定规格。在本法中进行薄层层析时鉴定限量,作为尿苷酸和其它核酸Rf值的一例如下表所示:
250nm/260nm
280nm/260nm
尿苷酸
尿 苷
尿嘧啶
肌苷酸
鸟苷酸
0.32
0.58
0.57
0.22
0.19
0.3
0.1
0.1
0.3
0.1
从上表可以看出,尿苷、尿嘧啶互相分离是困难的,可是尿苷酸和其它物质的分离是较容易的。
*用费歇尔逆滴定法进行。因为难溶于费歇尔滴定法用甲醇液中,所以要密封并放置1h。此时密封要十分注意,不要吸湿。本品有6分子的结晶水,其理论量是22.7%。另外,还有吸附水分,水量应在20%以下。
*作为本品的定量法,有定量磷、氮或者核糖等方法,但是利用尿嘧啶测定紫外部吸收的方法较简单,重要性很好,一般都使用。0.01mol/L盐酸溶液的分子吸光系数是9,900,以此为标准可求出含量。
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