异硫氰酸胍应用之提取DNA和RNA

摘要：本文介绍了异硫氰酸胍的一种用途，即异硫氰酸胍法同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸。该方法综合了经典的Trizol提取法和以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法两种方法，弥补了两种方法的缺陷。
关键词：异硫氰酸胍法，593-84-0，提取DNA和RNA，Trizol提取法，硅胶模柱式提取法
前言
异硫氰酸胍，CAS号：593-84-0，分子式：C2H6N4S，分子量：118.161，白色结晶粉末，熔点115-120℃，用于变性裂解细胞；提取RNA和DNA，无RNA酶和DNA酶活性,强蛋白变性剂，是苏州亚科化学的优势产品。文章介绍了专利型异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸。
异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸
随着分子生物学的快速发展，基因诊断成为检测动物疫病最准确而有效地手段，进行基因诊断的过程中，病毒核酸的提取是进行检测的前提条件，核酸提取的质量也影响检测的准确性。
当前，动物病毒核酸提取方法主要有经典Trizol提取法和以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法两种方法。经典Trizol提取法过程繁琐、周期长、提取效率低、技术要求高，以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法成本较高、提取RNA的质量不高、且只能提取RNA病毒。
一种同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法，包括步骤：对待提取物使用异硫氰酸胍裂解液裂解；硅胶膜吸附RNA；洗液Ⅰ除去杂蛋白；洗液Ⅱ洗去杂质；DEPC水洗脱核 酸；上述异硫氰酸胍裂解液包括3-7M异硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA，PH在4.3-4.6。
上述洗液Ⅰ包括5-6M盐酸胍，53-59%无水乙醇，K70-90μg/mL蛋白酶，PH在6.4-6.6；上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
进一步地，上述异硫氰酸胍裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA，pH在4.5。进一步地，上述洗液Ⅰ包括5.5M盐酸胍，56%无水乙醇，80μg/mL蛋白酶K，PH在6.5。进一步地，上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
上述操作步骤包括：
（1）取一干净离心管，100μL样品加入200μL的异硫氰酸胍裂解液中，振荡混匀，放置5分钟。
（2）加入与异硫氰酸胍裂解液等体积的无水乙醇，即200μL，颠倒反复混匀15秒。
（3）将过滤柱套在2mL收集管上，全部混合液移到过滤柱上，12,000rpm离心1分钟。
（4）弃收集管内的液体，往过滤柱加入600μL的洗液1，12000rpm离心1分钟。
（5）弃收集管内的液体，往过滤柱加入600μL的洗液2，12000rpm离心1分钟，再重复一次。
（7）弃收集管内的液体，过滤柱套在收集管上，12000rpm离心1分钟；
（8）换新的1.5mL离心管套上过滤柱，加20μLDEPC到过滤柱膜上，室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟，收集滤液，保存。
结束语
该发明的有益效果：同时提取动物血清样本、双拭子样本中的RNA病毒和DNA病毒核酸，具有方法简便、快速、成本低的特点。该方法为建立动物RNA病毒和DNA病毒多重PCR方法奠定核酸提取基础。