试验方法
1方法提要
2-羟基-6-氯喹喔啉的分析采用高效液相色谱法, 试样用N,N-二甲基甲酰胺溶解, 以甲醇+水为流动相, 使用以KromasilC-18为填料的不锈钢柱和紫外检测器, 在254 nm检测波长下对2-羟基-6-氯喹喔啉进行高效液相色谱分离和测定,采用外标法定量。

2　试剂和溶液
N,N-二甲基甲酰胺;甲醇, 色谱纯;水, 新蒸二次蒸馏水, 经滤膜过滤;2-羟基-6-氯喹喔啉标样, 已知质量分数≥98.0%。

3　仪器
高效液相色谱仪, 具有可变波长紫外检测器;色谱柱, 200 mm×4.6 mm不锈钢柱, 内装KromasilC-18填充物, 粒径5 μm;超声波清洗器;过滤器,滤膜孔径约0.45 μm;微量进样器, 50 μL。

4　色谱操作条件流动相, 甲醇+水(V(甲醇)∶V(水)=700 ∶300), 超声20 min备用;流速, 0.6 mL/min;柱温, 35℃;检测波长, 254 nm;进样体积, 5 μL;保留时间5.8min。
上述操作参数是典型的, 可根据仪器的不同特点对给定操作参数做适当调整, 以期获得最佳效果。

5　测定步骤
5.1　标样溶液的配制
称取2-羟基-6-氯喹喔啉标样0.05 g(精确至0.000 02 g)置于50 mL容量瓶中, 用N,N-二甲基甲酰胺溶解并用流动相稀释至刻度, 摇匀, 用移液管移取2 mL于50 mL容量瓶中, 流动相稀释至刻度, 摇匀备用。

5.2　试样溶液的配制

称取2-羟基-6-氯喹喔啉0.05 g(精确至0.000 02 g), 置于50 mL容量瓶中, 用N,N-二甲基甲酰胺溶解, 并用流动相稀释至刻度, 摇匀, 用中同一支移液管移取2 mL于50 mL容量瓶中, 用流动相稀释至刻度, 摇匀备用。

5.3　测定
在上述操作条件下, 待仪器基线稳定后, 连续注入数针标样溶液, 计算各针响应值重复性, 待相邻两针响应值相对变化小于1.5%, 按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

5.4　计算
将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样
溶液中2-羟基-6-氯喹喔啉的峰面积进行平均。
试样中2-羟基-6-氯喹喔啉的质量分数w按下式计算:
w=100×(A2 ×m1 ×P)/A1 ×m2

式中:
A1 —标样溶液中2-羟基-6-氯喹喔啉峰面积的平均值, mV;
A2 —试样溶液中2-羟基-6-氯喹喔啉峰面积的平均值, mV;
m1—标样的质量, g;
m2—试样的质量, g;
P—标样中2-羟基-6-氯喹喔啉的质量分数, %。
5.5　允许差
两次平行测定结果之差, 应不大于0.7%, 取其算术平均值作为测定结果。